典型病例診斷不難，對于表現不典型者診斷主要依據實驗室和輔助檢查。
1.確定是否重癥肌無力
主要根據病史，典型的臨床特點即受累骨骼肌活動后疲勞無力，眼部受累最常見，經休息或用膽堿酯酶抑制劑可以緩解，此外可進一步進行下列之一檢查確診。
（1）疲勞實驗（Jolly實驗）令患者做受累肌群的持續運動(或收縮)，如睜閉眼瞼，眼球向上凝視，持續吸氣，咀嚼或雙臂側平舉等動作，常在持續數十秒鐘后迅速出現眼瞼外翻，復視明顯，咀嚼無力或兩臂下垂等癥狀，此等反應即為肌疲勞現象。
（2）抗膽堿酯酶實驗疲勞實驗改善不明顯者可肌注甲基硫酸新斯的明或騰喜龍實驗。
（3）神經重復頻率刺激實驗和單纖維肌電圖檢查。
（4）血清nAChRab的檢測該檢測是MG診斷重要的參考依據，若陽性者有助于診斷，陰性者不能排除MG，眼肌型，兒童MG病例nAChRab多陰性。
（5）肌肉活體組織檢查可確診MG。
2.明確是否合并胸腺瘤
成人病例約75%胸腺增生，15%MG合并胸腺瘤；兒科病例8.4%合并胸腺增生，2.2%MG合并胸腺瘤，腫瘤常位于前上縱隔，除表現肌無力，一般無占位病變的癥狀和體征，易漏診，胸腺瘤多見于40歲以后男性患者，肌無力癥狀較重，對膽堿酯酶抑制劑療效不佳，易發生危象，側位或正位X線胸片偶可發現異常，縱隔CT掃描可直接顯示腫瘤部位，大小，形狀，與臨近器官的關系，免疫學檢查：CAEab(又稱胸腺瘤相關抗體)對MG患者提示胸腺瘤具有重要價值，MG合并胸腺瘤CAEab陽性率高達80%～90%，診斷尚需結合臨床和CT縱隔掃描，綜合分析。
3.明確有無其他并存癥
MG作為自身免疫疾病中一種“姐妹病”，可伴有以下夾雜癥：如甲狀腺功能亢進，類風濕關節炎，系統性紅斑性狼瘡，溶血性貧血，多發性肌炎或多發性硬化等，有相關疾病的病史，癥狀和體征，可以查出相應的免疫生化檢驗異常。
4.肌無力危象的診斷
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